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NGS在真是寰宇中的普及性有待进一步种植，有望让更多患者从头式靶向药物中获益，从而股东精确诊疗的发展。

乳腺癌当作女性关系升天的主要原因之一，现在已有多种药物靶向性生物象征物和预测性生物象征物被斥地出来。下一代测序（NGS）技艺在乳腺癌的精确诊疗规模饰演着至关弘远的脚色，并已成为针对TP53、PIK3CA、ESR1、BRCA1/2等常见突变基因检测的首选技艺。近期，一项征询[1]对NGS在乳腺癌真是诊疗环境中的应用进行了评估，征询效果深入NGS大概提供对于乳腺癌预测性生物象征物和药物靶向性生物象征物的弘远信息。这些发现不仅股东了精确诊疗的跨越，还为患者参与新药临床西宾提供了更多可能性。预测异日，进一步的征询有望揭示新的药物靶向性生物象征物，并促进更多新式靶向诊疗决策的斥地。

“医学界”特邀北京大学病院姜晗昉训导详备解读该征询，现劫夺弘远本质整理如下，以飨读者。

西宾措施

●患者聘任

征询者对2010年至2021年时间在三星医疗中心接受乳腺癌诊疗的患者进行了追忆性分析，共纳入180例患者，这些患者在活检或手术经过中蚁集的组织样本被用于进行下一代测序（NGS）。征询者详备分析了这些患者的组织病理学特征和基因特征。通过策画机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）以及正电子辐照断层扫描（PET-CT）的影像学尊府，依据好意思国癌症聚积委员会第8版表率，征询者针对每位患者的运转临床分期和病理分期进行了精确判定。

●组织病理学分析和免疫组化

本征询使用福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)组织进行组织病理学分析和免疫组织化学(IHC)染色。所有这个词FFPE组织均使用苏木精和伊红染色。由3名乳腺病理学家（H.L.、Y.A.C.和E.Y.C.）审查详备的组织病理学特征。使用LeicaBOND-III系统(LeicaBiosystems,Wetzlar,Germany)对FFPE组织的4μm切片进行IHC染色，以染色雌激素受体(ER；6F11，1:300，Novocastra，NewcastleuponTyne，UK)、孕激素受体（克隆16，1:1,200，Novocastra）、p53(DO7，1:1,200，LeicaBiosystems)、Ki-67(MIB1，1:200，Dako，Carpinteria，CA)、细胞角卵白5/6(D5/16B4，1:100，Dako)和VentanaBanchMarkXT平台(VentanaMedicalSystemsInc.，Tucson，AZ)，根据坐褥商决策进行HER2染色(4B5，VentanaMedicalSystemsInc.)。

使用QIAamp DSP DNA FFPE组织试剂盒(Qiagen,Hilden,Germany)从5μm FFPE切片中索求肿瘤DNA，并使用QUBIT dsDNA BR检测试剂盒(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)对索求的DNA进行定量。对于靶标拿获，征询者根据坐褥商的决策使用了SureSelectXT自动化试剂盒(Agilent,SantaClara,CA)。使用条形码制备配对结尾测序论库。为了考证基因组DNA的大小和质料，征询者使用了基因组DNA分析ScreenTape和基因组DNA试剂与Agilent4200磁带站(Agilent)。使用TG Next Seq500/550高输出试剂盒v2(Illumina,Inc.,SanDiego,CA)和TGNextSeq500/550中输出试剂盒v2(Illumina,Inc.)对文库进行测序。

自2018年3月起至2020年10月，本征询通过应用定制化的NGS面板CancerSCAN，对70例病例进行了分析。该面板针对与实体瘤关系的375个基因进行了靶向测序。使用基于杂交拿获的TruSight Oncology（TSO）500DNA/RNA NextSeq试剂盒（Illumina,Inc.）分析2020年11月至2022年7月为NGS征询收罗的其他110例病例。CancerSCAN和TSO500均由消失技艺东谈主员进行，效果由消失病理学家（H.L.和E.Y.C.）分析。TMB界说为每兆碱基(Mb)的体细胞突变数。TMB＜10界说为低TMB，TMB≥10界说为高TMB。为了准确策画TMB，排斥了所有这个词同义SNV、Indels、CNAs和会通变体。在用TSO500检测的病例中，根据坐褥商的评释，使用130个均聚物微卫星位点评价微卫星不踏实性（MSI）景色。当不踏实部位的百分比≥20%时，将病例归类为高度微卫星不踏实（MSIH）。

征询效果

●患者临床病理学特征

仅4例(2.2%)患者为男性，其余176例为女性。患者平均年岁为41.46岁，绝经前117例(65.0%)。34例患者在援手化疗后出现局部复发或边远退换，136例患者在新援手化疗(NAC)或姑息诊疗时间出现疾病推崇。其余10例患者中9例行NAC并深入部分缓解，1例未接受NAC。这10例患者在随访时间均未深入任何复发或边远退换的凭据。平均随访期为64.02个月（6.20-289.87个月）。随访时间，77例患者死于该疾病，81例患者会诊为乳腺癌。仅22例患者无疾病凭据。最常见的组织学会诊为无异常类型的浸润性乳腺癌(159/180，88.3%)，其次为化素性癌(14/180，7.8%)和浸润性小叶癌(4/180，2.2%)。根据IHC效果将病例进行分层后，三阴性乳腺癌（TNBC）为96例(53.3%)，HR+/HER2-乳腺癌为72例(40.0%)。在本征询东谈主群中，62例患者(34.4%)在姑息性化疗时波折受NGS，58例在NAC后，34例在手术和援手化疗后，26例在会诊时接受NGS。

在征询样本中，95例(52.8%)来自手术(66，69.5%)或活检(29，30.5%)时间的原发性乳腺癌。另外85例样本(47.2%)取自退换性乳腺癌。从退换性乳腺癌赢得的病例样本中，60例(70.6%)通度日检赢得，25例(29.4%)在手术时间赢得。最常见的退换部位是肝脏(27/85，31.8%)，其次是淋投合(14/85，16.5%)、肺(12/85，14.1%)、胸膜(12/85，14.1%)和脑(6/85，7.1%)。

●分子改动

最常检测到的SNV是TP53突变(123/180，68.3%)，其次是PIK3CA突变(51/180，28.3%)。CNAs中MYC扩增(36/180，20.0%)发生率最高，其次为CCND1扩增(22/180，12.2%)（图1）。HR+/HER2-乳腺癌和TNBC平分子改动的详备患病率总结见表1和表2。将本征询平分子改动的发生率与来自癌症基因组图谱(TCGA)和乳腺癌海外定约分子分类学(METABRIC)的效果进行相比，通过cBioPortal探问。在HR+/HER2-乳腺癌中，ESR1的SNV频率在统计学上高于TCGA，TP53的SNV频率在统计学上高于TCGA和METABRIC（Benjamini-Hochberg改造p值<0.05）。HR+/HER2-乳腺癌的CNAs频率及TNBC的SNVs和CNAs频率各别无统计学真谛。

图1. 临床病理学特征和基因改动的默示图

表1. 文件报谈的乳腺癌中不同基因SNV、插入和缺失的发生率

表2. 文件报谈的乳腺癌中不同基因扩增的频率

●PIK3CA突变

本征询中28.3%(51/180)的患者检测到PIK3CA SNV，在1例患者中检测到PIK3CA扩增。对于PIK3CA SNV的详备信息总结见表3。最常见的PIK3CA突变为H1047R(43.1%，22/51)，其次为E545K(17.6%，9/51)、N345K(13.7%，7/51)和E542K(9.8%，5/51)。1例患者发现其他突变。在HR+/HER2-乳腺癌患者中，31/72例(43.1%)存在PIK3CA突变，11/96例(11.5%)TNBC患者存在PIK3CA突变。9例HER2阳性乳腺癌患者(9/12，75%)存在PIK3CA突变。HR+/HER2-乳腺癌、HER2阳性乳腺癌和TNBC中PIK3CA突变的详备漫步如图2所示。在therascreen检测面板中，PIK3CA突变的比例为72.5%。在未包含在therascreen检测面板的PIK3CA突变中，N345K是检测到的频率最高的突变（50.0%）（图3）。根据IHC亚型改造后，掂量34.7%(25/72)的HR+/HER2-乳腺癌患者可从磷酸肌醇3-激酶(PI3K)通路扼制剂中获益。

表3. PIK3CA突变的详备信息

图2. 基于免疫组化亚型的PIK3CA单核苷酸变异(SNVs)的漫步。(A)HR+/HER2-乳腺癌。(B)HER2阳性乳腺癌。(C)三阴性乳腺癌。所有这个词亚型中最常见的SNV是H1047R

图3. 基于therascreen检测面板的PIK3CA单核苷酸变异(SNVs)的漫步。(A)therascreen检测面板中PIK3CA SNV的流行率。(B)未纳入therascreen检测面板的PIK3CA SNV的漫步

●BRCA1/2突变

6例(3.3%)患者发现BRCA1突变，13例(7.2%)发现BRCA2突变。为说明胚系突变，从84例患者中蚁集匹配的浅薄血样，并进行BRCA1/BRCA2测序。在这84例患者中，4例患者发现BRCA1胚系突变，5例患者发现BRCA2种系突变，NGS也检测到所有这个词突变。4例仅通过NGS检测到BRCA2突变的患者被证实存在体细胞突变。在NGS检测中，发现BRCA1基因突变的6例患者中，有2例未进哄骗用匹配血样的BRCA1/BRCA2基因测序；雷同，在检测出BRCA2基因突变的13例患者中，有4例未接受相应的测序检测。

●ESR1突变

11例患者(6.1%)检测到ESR1突变，其中10例(5.5%)为HR+/HER2-乳腺癌，另1例为TNBC。ESR1突变患者的详备信息总结见表4。2例HR+/HER2-乳腺癌患者和1例TNBC患者既往未接受过内分泌诊疗。1例患者有2个ESR1突变——E380Q/Y537D。ESR1突变细目如下：8例SNV，5例D538G，1例E380Q/Y537D，1例L536H，1例L536_Y537insH，3例会通，2例ESR1:CCDC170会通，1例ESR1:TAB2会通。

表4. ESR1改动的乳腺癌患者的临床特征

●基于NGS效果的精确诊疗根据NGS分析效果，13例患者(13/180，7.2%)接受了靶向诊疗。该信息详见表5。4例患者佩带BRCA1或BRCA2胚系突变，并接受PARP扼制剂诊疗。在BRCA突变患者中，3例患者在临床西宾中接受了诊疗，另1例患者通过要紧西宾新药扩大使用(e-IND)接受了靶向诊疗。另外9例患者存在PIK3CA突变，并接受PI3K通路扼制剂诊疗。在9例PIK3CA突变的患者中，6例患者不错通过e-IND赢得PI3K通路扼制剂诊疗，另外3例患者需要罕见的分子会诊分析。

表5. 以精确医学为基础的靶向诊疗

●肿瘤突变负荷

平均TMB为7.37/Mb(0-68.7)，中位TMB为6.3/Mb。根据年岁（≤50岁vs.>50岁，7.03/Mb vs.8.29/Mb，p=0.426）、绝经景色（绝经前vs.绝经后，6.93/Mb vs.8.29/Mb，p=0.329）、样本是否来自退换灶（原发灶vs.退换灶，8.02/Mb vs.6.64/Mb，p=0.168），样本是否在诊疗后赢得（运转vs.诊疗后，6.74/Mb vs.7.48/Mb，p=0.506）、NGS时辰（运转vs.NAC后vs.复发时vs.姑息性化疗时间，6.74/Mb vs.7.05/Mb，vs.6.38/Mb vs.8.48/Mb，p=0.448）或亚型（HR+/HER2- vs.HER2阳性vs.TNBC，7.73/Mb vs.9.98/Mb vs.6.78/Mb，p=0.270）分层，其TMB之间无显贵各别。11例患者为高TMB(6.1%)，高TMB病例的平均TMB为26.54（范围，10.90-68.70；中位数，22.00）。在使用TSO500检测的患者中，莫得发现具有高或低微卫星不踏实性的肿瘤类型，这可能影响该患者群体的预后和后续诊疗聘任。

征询论断

NGS在乳腺癌精确诊疗中的弘远性无谓置疑，但真是临床环境中的普及性仍待进一步种植。不仅如斯，鉴于NGS检测大概识别出预示侵袭性行为以及对内分泌诊疗或靶向诊疗耐药的预测性生物象征物，而况有助于发现可能使患者有契机参与临床西宾的潜在药物靶向性生物象征物，从而对乳腺癌的预后进行预测。因此，NGS在晚期或退换性乳腺癌患者中的潜在价值，值得通过进一步征询来深入议论。

人人先容

姜晗昉 训导

北京大学肿瘤病院乳腺肿瘤内科，肿瘤学博士、副主任医生

北京大学肿瘤病院临床征询解决委员会委员

中国抗癌协会乳腺癌专科委员会委员

中国医药训导协会肿瘤临床科研翻新发展专科委员会常委

中国女医生协会乳腺专科委员会常委

中国中医药征询促进会中西医多学科肿瘤防治专科委员会常委

北京慢性病防治与健康训导征询会乳腺肿瘤专科委员会第一届委员会常委

北京癌症防治学会乳腺癌精确靶向诊疗专科委员会委员

北京乳腺病防治学会健康解决专科委员会第二届委员会委员

中国低级卫生保健基金会乳腺肿瘤专科委员会委员

好意思国加州大学旧金山分校医学肿瘤中心探问学者

参考文件：

[1].Lee H, Cho YA, Kim DG, Cho EY. Next-Generation Sequencing in Breast Cancer Patients: Real-World Data for Precision Medicine. Cancer Res Treat. 2024 Jan;56(1):149-161.

审批编号：CN-145910 逾期日历：2025-10-23

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